近日,科学家们对人脂肪间充质干细胞(humanadipose-derivedstemcells,hADSCs)治疗急性肝功能衰竭进行了一系列研究,其中包括:分离培养并探讨hADSCs移植对急性肝衰竭大鼠生存情况和肝功能重建的影响;观察其在大鼠体内各脏器中的分布、迁移及其对受体肝脏再生的促进作用;研究hADSCs对肝衰竭大鼠生存率的影响。
一、研究方法:
从人腹部皮下脂肪分离hADSCs,经贴壁筛选法纯化细胞,无血清培养基体外培养扩增。以D-氨基半乳糖(D-gal)大鼠腹腔内一次性注射构建SD大鼠急性肝衰竭模型。30只肝衰竭SD大鼠随机分为hADSCs治疗组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,治疗组脾脏注射5×个hADSCs,对照组向脾脏注射相同体积的PBS,动态检测多项血生化指标和肝脏组织学表现。20只肝衰竭SD大鼠随机分为脾脏移植组和股静脉移植组,分别经脾脏和股静脉途径注入5×个通过慢病毒感染表达ZsGreen的hADSCs,检测两种移植途径中hADSCs在大鼠心、肝、脾、肾、肺等器官的分布和迁移情况;检测肝、脾组织中Ki-67蛋白的表达情况,受体肝细胞凋亡情况。40只肝衰竭大鼠随机分为DMEM-F12对照组、干细胞移植组、干细胞浓缩培养基移植组、干细胞裂解液移植组。经股静脉途径分别注入ulDMEM-F12、5×个hADSCs、浓缩培养基、干细胞裂解液。动态检测大鼠血中HGF、VEGF表达情况。
二、研究结果:
1、通过体外分离人体脂肪组织,可获得hADSCs,该细胞表达hADSCs相关表面抗原并且能被诱导分化成脂肪细胞和软骨细胞,证明实验成功分离出hADSCs;
2、脾脏移植hADSCs治疗肝衰竭大鼠,大鼠总体病死率明显低于PBS对照组,同时,观察到治疗组大鼠的肝功能得到明显改善,相关液生化指标显著低于PBS对照组,HE染色显示肝脏组织形态明显改善;
3、hADSCs经脾脏、股静脉移植后,大部分迁移至肝脏、脾脏及肺部,经股静脉移植组细胞向肝脏趋化的效率更高,但差异无统计学意义;
4、hADSCs移植可促进急性肝衰竭大鼠肝脏细胞再生,并抑制其凋亡;
5、干细胞浓缩培养基移植组和干细胞裂解液移植组大鼠的72小时生存率较DMEM-F12对照组明显提高。
三、研究结论:
1、体外分离脂肪组织进行贴壁培养可获取hADSCs;
2、hADSCs移植可改善急性肝衰竭模型大鼠的肝功能情况,提高其存活率,有望用于肝衰竭的治疗;
3、经脾脏和股静脉途径移植hADSCs均可用于肝衰竭治疗,具有促进内源性肝脏细胞再生和抑制凋亡的作用;
4、干细胞可通过旁分泌途径分泌细胞因子促进细胞再生,改善肝衰竭大鼠生存率。
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