临床微生物标本规范化采集和送检
中国专家共识
第四节：其它无菌体液标本
一、脑脊液
脑脊液是诊断中枢神经系统感染最主要的标本。
一)临床采样指征：
临床出现不明原因的头痛、发热、脑膜刺激征（颈强直、克氏征、布氏征阳性）、脑神经病理征象；脑积水；脑性低钠血症等症状，怀疑中枢神经系统感染时应送检脑脊液培养标本，并同时送检血培养标本。
二)标本采集：
怀疑患者细菌性脑膜炎时，应立即采集脑脊液和血培养，应在抗菌药物使用前采集。怀疑分枝杆菌、隐球菌或慢性脑膜炎时，可能需多次采集脑脊液标本。如怀疑存在颅内压增高时，应先行检查头颅CT，必要时，可先予以脱水治疗再行穿刺。
怀疑细菌性脑膜炎时，建议同时送检2-4套血培养。
由临床医师采集，严格执行无菌操作。消毒采集部位皮肤，通常在第3、4腰椎或第4、5腰椎间隙插入带有管芯针的空针，进针至蛛网膜间隙，拔去管芯针，收集脑脊液5ml～10ml，分别置于3支无菌试管中，第一管做化学或免疫学检查，第二管做细菌学检查，第三管做细胞学检查。细菌学检查要求适量标本：细菌≥1ml，真菌≥2ml，分枝杆菌≥2ml。脑脊液采集量不能少于1ml。尽可能多收集脑脊液，可以提升培养的阳性检出率，尤其是针对真菌和分枝杆菌的培养。如送检T-SPOT.TB，还需注意添加肝素抗凝。
三)标签及申请单：
标本标识要求有唯一标识号或条码。血培养瓶及无菌管需清晰标注患者基本信息、标本来源、标本采集时间、送检目的、临床诊断、申请医师等。应注明是否已经使用抗菌素。
特殊病原菌检查如奴卡菌、真菌、分枝杆菌应注明。脑室分流的标本应注明“脑室分流液”，而不是“脑脊液”。
四)标本运输：
标本采集后应立即送检，不超过1小时；脑脊液标本不可冷藏。
五)实验室拒收标准
1.样本容器上未贴标签，或标签与检验申请单不符；
2.样本外漏、容器破损或明显受到污染；
3.标本量少，送检延迟，未按规定保存。
二、胸水
胸水以细菌性胸膜炎最为常见，也可见于膈下炎症、肺结核、肺炎、肺结核等疾病。低蛋白或肿瘤性疾病也可以引起的胸腔积液。
一)临床采样指征：
患者听诊、影像学检查发现胸腔积液，胸腔穿刺后发现胸腔积液浑浊、乳糜性、血性或脓性，考虑感染性胸腔积液(肺结核、肺炎、胸膜炎)患者应送检，进行涂片染色、细菌培养等细菌学检测。
二)标本采集：
尽可能在抗菌药物使用前采集。
由临床医师经皮穿刺或外科方式获得；严格执行无菌操作。通过影像学或叩诊定位穿刺部位，消毒穿刺部位皮肤，麻醉穿刺部位，用中空孔针穿刺至胸膜腔内，抽取胸水标本；标本采集后可注入可直接注入血培养瓶送检，或将标本收集到带螺旋帽内无菌管送检，以便微生物室进行涂片检查。标本量分别为细菌培养≥1ml，真菌培养≥10ml，分枝杆菌培养≥10ml。不要拭子蘸取标本。如送检T-SPOT.TB，还需注意添加肝素抗凝。
三)标签及申请单：
申请单除应包括患者基本信息外，注明患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、标本来源、检测目的，注明胸水的类型、性状，以及特殊检验需求。血培养瓶及无菌管要求有唯一标识号或条码。需标注患者基本信息、标本来源、标本采集时间、送检目的等。
四)标本运输：
标本采集后应立即送检，通常室温15分钟内应送至实验室，若不能及时送检，不可冷藏。室温保存不得超过24小时。
五)实验室拒收标准
1.样本容器上未贴标签，或标签与检验申请单不符；
2.样本外漏、容器破损或明显受到污染；
3.标本量过少，或凝固；
4.送检延迟，未按规定保存
三、腹水
腹腔积液分为漏出液和渗出液，渗出液多由感染引起，常见细菌、结核分枝杆菌、厌氧菌感染。
一)临床采样指征：
出现但不局限于发热、腹胀、腹部疼痛、压痛、反跳痛；并经影像学检查发现腹腔内积液者。
二)标本采集：
尽可能在抗菌药物使用前采集。
由临床医师经皮穿刺或外科方式获得；严格执行无菌操作。可由超声定位。消毒采集部位皮肤，麻醉穿刺部位，用中空孔针穿刺，标本采集后可注入无菌瓶或无菌试管送检。
三)标签及申请单：
申请单除应包括患者基本信息外，注明患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、标本来源、检测目的，注明腹水的类型、性状，以及特殊检验需求。标本标识要求有唯一标识号或条码。无菌管需标注患者基本信息、标本来源、标本采集时间、送检目的等。
四)标本运输：
标本采集后应立即送检，通常室温15分钟内应送至实验室，若不能及时送检，不可冷藏。室温保存不得超过24小时。
五)实验室拒收标准
1.样本容器上未贴标签，或标签与检验申请单不符；
2.样本外漏、容器破损或明显受到污染；
3.标本量过少，或凝固；
4.送检延迟，未按规定保存
四、关节液
感染是导致关节滑膜炎一个主要原因。常见细菌感染，偶见病毒、真菌、分枝杆菌感染。可抽取关节腔积液进行革兰氏染色、细菌培养、厌氧菌培养、真菌培养、结核分枝杆菌等细菌学检测。
一)临床采样指征：
影像学发现关节腔积液，伴有关节肿胀、疼痛，活动受限，病因不明、治疗无效，怀疑感染性关节炎应送检。
二)标本采集：
尽可能在抗菌药物使用前采集。
关节腔穿刺应由有经验的临床医师在严格的无菌操作下进行。严格的皮肤消毒，局部麻醉穿刺部位，中空针头穿刺入关节腔，尽可能多地抽取关节液标本。可直接注入血培养瓶或无菌管内送检。如果考虑厌氧菌培养，需要在厌氧条件下运送标本。
如有全身发热症状，应同时采集血培养标本。
三)标签及申请单：
申请单除应包括患者基本信息外，注明患者的临床诊断、症状、是否使用了抗菌药物、标本来源、检测目的，注明关节液的性状，以及特殊检验需求。标本标识要求有唯一标识号或条码。需标注患者基本信息、标本来源、标本采集时间、送检目的等。
四)标本运输：
标本采集后应立即送检，通常室温15分钟内应送至实验室，若不能及时送检，不可冷藏。室温保存不得超过24小时。
五)实验室拒收标准
1.样本容器上未贴标签，或标签与检验申请单不符；
2.样本外漏、容器破损或明显受到污染；
3.标本量过少，或凝固；
4.送检延迟，未按规定保存
第五节：胃肠道标本：
胃肠道感染，包括细菌性痢疾、微生物引起的胃肠炎、细菌性食物中毒、肠道感染、消化性溃疡和抗生素相关性腹泻等疾病，是细菌、真菌、病毒、原虫和寄生虫经口腔进入消化道后一定条件下引起的胃肠道功能障碍。由于引起胃肠道感染的微生物种类繁多，诊断比较困难，因此加强对胃肠道标本的病原微生物检测具有重要临床意义。正确的标本采集和及时送检是保证胃肠道感染细菌学检验质量的关键。
一、粪便标本
粪便是诊断胃肠道感染的最主要标本。
一)临床采样指征：
当患者出现腹痛、腹泻（水样便、脓血便），或伴有发热；粪便常规镜检异常，建议采集粪便标本，进行细菌培养。
二)标本采集与要求
标本的采集尽可能在应用抗菌药物治疗前，标本应收集在宽口便盒内，并加盖密封。如考虑空肠弯曲菌需要无血弯曲菌琼脂培养基。艰难梭状杆菌需在厌氧环境中生存，建议在床旁进行标本的采集及接种。接种后的标本立即放入厌氧袋内，送至实验室。重复采集标本，可提高阳性检出率。
1.自然排便法
患者在干燥清洁便盆（避免使用坐式或蹲式马桶）内自然排便后，挑取有脓血、黏液部分的粪便2-3g（液体粪便则取絮状物1-3ml）放入无菌便盒内送检。若无黏液、脓血，则在粪便上多点采集送检。此为常规方法。
2.直肠拭子法
用肥皂水将肛门周围洗净，将占有无菌生理盐水的棉拭子插入肛门4-5cm（儿童为2-3cm）。棉拭子与直肠粘膜表面接触，轻轻旋转拭子，可明显在拭子上见到粪便。将带有粪便标本的棉拭子插入运送培养基，立即送检。本方法仅适用于排便困难的患者或婴幼儿，不推荐使用拭子做常规标本。
三)标签及申请单
申请单上应包括患者姓名、病历号、采集日期时间、诊断、相关旅行史等。标本标识要求有唯一标识号或条码。标本上的标签中应包括患者姓名、病历号、采集时间等。送检的新鲜标本应报告粪便的性状，标本表面或标本里面存在血液也应注明。
四)标本运输
粪便标本应尽快送检，室温下运送标本时间不超过2小时。若不能及时送检，可加入pH7.0磷酸盐甘油缓冲保存液或使用Cary-Blair运送培养基置于4℃冰箱保存，保存时间不超过24小时。
直肠拭子采集的标本必须置入Cary-Blair运送培养基或GN肉汤中送检。室温下运送时间不应超过2小时，4℃冰箱保存不超过24小时。
高度怀疑霍乱弧菌感染的标本需专人运送，必须符合特殊标本的安全要求。
五)实验室拒收标准
标本容器上未贴标签或贴错标签、送检时间超过规定时间、保存不当、标本有泄漏、送检容器不合格（如容器被压碎或有破裂）、标本量不足、干燥的拭子、含钡粪便、干便、明显污染的粪便以及一日内重复送检的标本，不做实验室相关检测，并应设法与临床医师联系，可要求重新留取标本，做好记录。在没有与医师沟通之前标本不应丢弃，仍按实验室标本保存原则存放。
若采集2小时后未使用运输培养基运送、以运输培养基送检但4℃保存超过48小时或35℃保存超过24小时的标本不能送检，应在报告单上标记“样本运送延迟，培养可能出现假阴性”。
二、胃活检组织标本
胃镜活检组织培养适用于胃炎、消化性溃疡的患者，主要用于幽门螺杆菌的检测。
一)临床采样指征：
一般不建议只为幽门螺旋杆菌诊断进行胃镜检查。接受胃镜检查者，可进行活组织染色镜检。幽门螺旋杆培养因其生长条件要求复杂，不能常规进行培养。
二)标本采集与要求
经胃镜用活检钳在胃窦小弯侧距幽门5cm（邻近胃角处）、胃窦大弯侧正对胃角处或病变邻近处采集1-2块样品。为了明确内镜所见病变的性质，可选择病变处局部黏膜进行活检。
隆起性病灶在其顶部（充血、糜烂等）及其基底部（糜烂、凹凸不平、色泽改变等）活检，息肉的隆起性病灶也可完整切除后送检；平坦性病灶在病灶周边或中央、黏膜皱襞中断处活检；溃疡性病灶在溃疡边缘黏膜隆起的顶部或内侧黏膜多点活检；局部黏膜病灶也可根据染色、放大内镜观察的结果，针对最可疑或最典型的病变部位进行活检。
标本采集应在停服铋剂或抗菌药物7天后进行。
三)标签及申请单
申请单上应包括患者姓名、病历号、采集日期时间、诊断等，要明确注明标本采集的部位，以及检测目的，如“幽门螺旋杆菌培养”。标本标识要求有唯一标识号或条码。标本上的标签中应包括患者姓名、病历号、采集时间、采集部位等。送检的新鲜标本应报告粪便的性状，标本外观。
四)实验室拒收原则
对于没有将患者和采集信息标识完整的标本应及时联系临床医师，补全信息；
对于标本容器贴错标签、送检容器不合格、送检时间超过规定时间、样本保存不当、有明显的污染等时应拒收。
第六节：生殖道标本
生殖系统感染主要包括外阴部病变、尿道炎、阴道炎、阴道病、宫颈炎、子宫内膜炎和盆腔炎。病原体包括细菌、真菌、淋病奈瑟菌、解脲脲原体和人型支原体、沙眼衣原体等。各类感染的临床症状和体征比较相似，临床不易区分。通过检测明确诊断对于治疗，尤其是保证患者治疗依从性至关重要。
大多数生殖道感染为性传播性疾病（STD）,当疑为生殖道感染性疾病时，首先了解是否有不洁性交史，然后根据症状确定检查方向。对于男性患者来讲，先检查尿道是否有脓性分泌物，再依次是前列腺液、精液。对于女性患者，采集阴道后穹隆处或宫颈分泌物作培养或涂片镜检。
一)临床采样指征：
具有外阴溃疡、瘙痒及灼热感，出现分泌物、赘生物等症状者。
二)采样要求
1.病原体培养应在抗菌药物应用前或停药一周后采集标本。
2.生殖器是开放性器官，标本采集过程中应遵循无菌操作以减少杂菌污染。
3.阴道内有大量正常菌群存在，采取宫颈标本应避免触及阴道壁。
4.沙眼衣原体在宿主细胞内繁殖，采集时尽可能多的取上皮细胞。
三)采集方法
1.尿道分泌物
（1）男性：取样前至少1小时内不要小便。用无菌生理盐水清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦干，用男性拭子采取从尿道口溢出的脓性分泌物或将男性拭子插入尿道内2～4厘米取分泌物，置无菌试管中。如无脓液溢出，可从阴茎的腹面向龟头方向按摩，促使分泌物溢出。
（2）女性：取样前至少1小时内不要小便。用无菌生理盐水清洗尿道口，用灭菌纱布或棉球擦干，然后经阴道内诊压迫尿道，从尿道的后面向前按摩，使分泌物溢出，用无菌女性拭子采样。无肉眼可见的分泌物时，可用灭菌拭子轻轻深入前尿道内，转动并停留10～20秒钟，拔出后，置入无菌试管内送检。
2.阴道分泌物：用扩阴器扩张阴道，用灭菌女性拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或后穹隆处分泌物。退出时不要触及皮肤，避免污染
3.宫颈分泌物：用扩阴器扩张阴道，先用无菌棉球擦除宫颈口分泌物，再用女性拭子插入宫颈管2厘米，轻轻转动，并停留10到30秒。钭采样拭子置入无菌试管内送检。
4.子宫腔分泌物：用扩阴器扩张阴道，在宫颈内放置导管，通过导管插入培养拭子的尖端并采集子宫内腔分泌物。防止接触宫颈黏膜，减少污染。拭子置于无菌试管内送检。
5.巴氏腺、尿道旁腺：清洗或局部消毒，然后压迫腺体，使分泌物溢出，用无菌拭子采样。
6.盆腔脓肿者，应消毒阴道后，进行后穹隆穿刺，由直肠子宫凹陷处抽取标本。
7.前列腺液：用肥皂和水清洗阴茎头，经直肠前列腺按摩获取前列腺液，用无菌拭子采集前列腺液。标本置于无菌容器内送检。
8.精液：受检者应在5天内未排精。清洗尿道口，体外排精，精液置于灭菌容器内送检。
9.溃疡分泌物：先用生理盐水清洗患处，再用灭菌棉拭子取其边缘或其基底部的分泌物，标本置于灭菌试管内送检。
四)标签及申请单
每份标本都应贴上标签并标明必要信息，在检验申请单上填写足够的有关临床资料。包括病人情况（病区、病人姓名、住院号）、标本情况（标本类型、检验目的、采集部位、采集方法、采集时间等）和病人用药等信息。
五)标本运输
标本应在室温下15分钟内送到检验科。如果超过2小时送达，冷藏保存。
六)实验室拒收标准
1.申请错误：如下生殖道标本要求做厌氧培养，阴道分泌物要求做淋病奈瑟菌涂片
2.标识错误：无标签或标签不完整，或标本标识与申请单标识不一致；没有标出标本采集时间及部位；没有在申请单上注明标本来源和送检目的等
3.送检错误：送检延误；运送培养基错误；运送温度错误。
4.容器错误：没有用无菌容器，容器破裂或渗漏
5.标本错误：标本有明显污染，标本量不足或已干。
第七节：皮肤、软组织标本
皮肤及软组织感染(SSTI)是致病菌侵犯表皮、真皮和皮下组织引起的炎症性疾病。皮肤及软组织感染包括烧伤创面感染、手术后切口感染、急性蜂窝织炎、外伤感染、咬伤感染及褥疮感染等。
对大多数开放性损伤感染部位的取样，应在清洁创面后，在无菌条件下于深层基底或病变中心及边缘取样。
一、烧伤创面感染标本：
烧伤患者的创面、组织活检、血培养等的细菌学检测结果对临床医生进行烧伤感染的诊断和治疗十分重要。创面的拭子标本或组织活检标本都可以进行细菌定量培养。出现全身感染症状时，应同时采集血培养标本。在采集表面拭子或组织活检标本之前，应对创面彻底清洁，且未局部应用抗菌药物。
一)临床采样指征：
由于烧伤的早期创面无菌，烧伤后12小时勿采集标本。当患者出现发热、创面恶化时，考虑采样
二)标本采集
首先应应无菌生理盐水或注射用水清洁创面
1.表面拭子：采用无菌棉拭子用力刮取创面，置无菌试管内，封闭管口；
2.组织细菌定量培养的标本采取：在无菌条件下，切取深度烧伤痂下组织,以0.3-0.5克为宜，
3.厌氧培养：不能用拭子，而应采用注射器抽吸的方法采集深部、创面边缘的标本。
三)标签及申请单：
标本标识要求有唯一标识号或条码。标本上的标签除应包括患者姓名、病历号、诊断、检验项目等基本信息外，应标注采集部位及检测目的，必须注明采集部位是表浅还是深部，标明需氧或者厌氧培养，必要时需注明病程的阶段。
四)标本运输：
1.应尽快将标本送至实验室检测
2.如果1小时内无法将标本送达实验室，需冷藏保存。
3.不要将用于培养的组织标本置于福尔马林中。
五)实验室拒收标准
可对标本进行革兰染色，评价标本质量：如果存在上皮细胞，说明标本存在表面污染，培养结果将受影响；如果只有白细胞，说明标本质量合格。
实验室出现以下情况，可执行标本拒收：
1.样本容器上未贴标签，或标签与检验申请单不符；
2.样本外漏、容器破损；
3.标本明显污染；
4.延误送检，未按规定保存。
二、脓肿标本：
一)临床采样指征：
1.皮肤或皮下脓肿受累部位出现红、肿、热、痛，需手术切开引流时；
2.深部脓肿表现为局部疼痛和触痛并伴有全身症状，发热、乏力食欲减退等；
3.创伤或手术部位感染。
二)采样要求：
1.尽可能在抗菌药物使用前采集。
2.厌氧培养应注意避免正常菌群污染和接触空气。开放性脓肿不能做厌氧菌培养
3.闭锁性脓肿或深部切口感染标本不能用拭子采集。
4.出现发热、寒战等全身感染症状患者应同时送检血培养
三)采集方法：
1.开放性脓腔：需进行清创。用无菌生理盐水清洁创面，用拭子采集深部伤口或溃疡基底部的分泌物，至少采集两个拭子（分别用于涂片和培养）；或剪取深部病损边缘的组织。
2.封闭的脓肿：对病灶局部的皮肤或黏膜表面彻底消毒，用注射器抽取脓液，放入无菌容器内，同时送需氧及厌氧培养。或将脓肿切开引流后，取脓肿壁的一部分送检。
3.瘘管或窦道脓液：最好在外科探查时采集最深处组织。
四)标签及申请单：
标本标识要求有唯一标识号或条码。清晰标注患者基本信息、标本来源，不要仅标注为“伤口标本”。要标明来自开放性或闭合性损伤。标明需氧和或厌氧培养。
五)标本运输：
1.标本采集后应立即送检，通常室温不超过1小时送至实验室
2.若不能及时送检，需4℃保存不超过24小时，
3.厌氧菌培养不可放置冰箱保存。
4.组织应保持湿润并在30分钟内送至实验室，不可冷藏。
六)实验室拒收标准
可对标本进行革兰氏染色，评价标本质量：如果存在上皮细胞，说明标本存在表面污染，培养结果将受影响；如果只有白细胞，说明标本质量合格。
实验室出现以下情况，可执行标本拒收：
1.样本容器上未贴标签，或标签与检验申请单不符；
2.样本外漏、容器破损或明显受到污染；
3.标本量不足或干涸
延误送检，未按规定保存，实验室应与临床联系，可作让步接收，同时在报告结果时注明情况。
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